本生闡述：細胞培養(yǎng)板的選擇與常見問題解答
 

　　細胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型);培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536  孔等;具體選擇時根據(jù)培養(yǎng)細胞的類型、所需培養(yǎng)體積及不同的實驗?zāi)康亩ā?/p>

　　1)平底和圓底(U型和V型)培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇：

　　貼壁細胞一般用平底培養(yǎng)板。懸浮型細胞的培養(yǎng)一般用V型。U型培養(yǎng)板亦多用于培養(yǎng)懸浮型細胞 。V型培養(yǎng)板有時用做免疫學(xué)血凝集的實驗。

　　不同型狀的板子自然有不同用途。平底的什么類型的細胞都可用，但當細胞數(shù)目較少，如做克隆時，就用96孔平底板，另外，做MTT等實驗時，無論貼壁和懸浮細胞，一般均用平底板。

　　至于U或V型板，一般在某些特殊要求時才使用。如在免疫學(xué)方面，當做兩種不同淋巴細胞混合培養(yǎng)時，需要二者相互接觸以刺激，因此，一般需要U型板，因細胞會由于重力的作用而聚集在一個很小的范圍內(nèi)。

　　V型板的用途更少，一般用于細胞殺傷實驗時，為了使效靶細胞緊密接觸，常使用V型板，但這種試驗也可用U型板替代(加入細胞后，低速離心)如果是養(yǎng)細胞的話，通常是選用平底的。

 

　　圓底的好像沒聽說過拿來養(yǎng)細胞。圓底的通常是拿來做分析， 化學(xué)反應(yīng)， 或是保存樣品用的， 因為圓底比較好將液體吸得干凈，如果用平底的就不好吸了。不過，  如果你是要測吸光值的話，  一定要買平底的才行。大部分細胞培養(yǎng)都用平底培養(yǎng)板，便于鏡下觀測、有明確的底面積、細胞培養(yǎng)液面高度相對一致，還便于MTT檢測。圓底培養(yǎng)板主要用于同位素摻入的實驗，需要用細胞收集儀收集細胞的培養(yǎng)，如“混合淋巴細胞培養(yǎng)”等。

　　2)細胞培養(yǎng)常見問題與解答

　　問：我看到培養(yǎng)板有4、6、12、24、48、96孔幾種規(guī)格 ，但不知道到底什么實驗用哪種規(guī)格。

　　答：要根據(jù)你具體的實驗要求，流式一般用6孔，MTT一般用96孔，細胞爬片一般用24孔等，要具體根據(jù)你實驗來定。

　　問：我想測吸光度用酶標儀，用多孔細胞培養(yǎng)板行嗎?請問酶標板多孔細胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別?

　　答：用多空細胞培養(yǎng)板測吸光度肯定可以拉，我們經(jīng)常用它來做樣品的蛋白定量和MTT檢測。

　　區(qū)別：酶標板一般要比細胞培養(yǎng)板貴，細胞板主要做細胞培養(yǎng)，但也可以用來測蛋白濃度;酶標板包括包被板和反應(yīng)板，一般不能用做細胞培養(yǎng)，它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測，它需要更高的要求還需要特定的酶標工作液。

　　常用不同培養(yǎng)板的孔底面積及推薦加液量：不同孔板所加培養(yǎng)液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范圍，結(jié)合不同孔的底面積就可算出各培養(yǎng)孔的適宜加液量。若加液量過多會影響氣體(氧氣)交換，而且在搬動過程中易溢出造成污染。具體所加細胞密度依實驗的目的不同靈活掌握。

　　3)細胞培養(yǎng)板的密閉和污染問題

　　細胞培養(yǎng)板的加樣和操作：細胞培養(yǎng)板在進行細胞操作時同樣遵循嚴格無菌的原則，各項操作要規(guī)范、科學(xué)，不對細胞的生長造成額外的影響。這其中常見的問題就是如何加樣后細胞的均勻和盡量減少換液對細胞生長狀態(tài)的影響。

　　問：96，24孔培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿的蓋子都很松，這樣是方便了透氣，但是細菌、霉菌等污染物會不會也隨著溜進去呢?

　　答：

　　1. 蓋子很松，屬于半開放培養(yǎng)，這樣的目的是透氣(實際上是為了使培養(yǎng)皿外的co2能夠與培養(yǎng)皿充分交換，維持培養(yǎng)基的pH值)。

　　2.  凡事有利必有弊，這樣當然增加了污染的可能性。此外這樣還會使培養(yǎng)皿內(nèi)的液體蒸發(fā)，這對于定量的藥物來說就顯得值得注意了。所以以下二條措施是必須的：

　　a 培養(yǎng)箱內(nèi)空氣必須清潔(定期紫外線照，酒精擦洗，盡量少開關(guān)培養(yǎng)箱);

　　b 培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度必須始終保持為100%(培養(yǎng)箱內(nèi)放置無菌蒸餾水的水槽)。

　　就好像培養(yǎng)皿，也是一個蓋倒扣的容器，也不會污染。主要是因為蓋子“L”型邊緣產(chǎn)生氣流負壓的緣故，灰塵上面才附著有微生物，而氣流攜帶的灰塵是無法通過產(chǎn)生負壓的蓋邊緣的。而透氣作用只是通過空氣的擴散，不會產(chǎn)生氣流，所以只會透氣不會透菌。

　　問：我使用24孔板，在其中的某些孔中有操作(在超凈臺內(nèi))，而其它孔中還有細胞要培養(yǎng)，我很擔心這樣會污染，不知道要注意什么?大家不知道有什么好的建議。

　　答：在超凈臺內(nèi)如果操作規(guī)范的話應(yīng)該可以的，我想你可以充分利用培養(yǎng)版的蓋子，盡量只暴露要操作的孔，將其它孔用蓋子蓋起來。這是我的一點粗淺的見解，拋磚引玉吧!

　　4)細胞分布不均及解決辦法

　　問：我的細胞接種培養(yǎng)板，細胞總是聚集在周邊部分，該如何處理啊?我看園子里有的戰(zhàn)友的細胞卻是聚集在中間，是不是板子的質(zhì)量問題啊?

　　答：請問你的細胞是如何混勻的?是滴管吹打還是振蕩培養(yǎng)板?如果是后者，而且是轉(zhuǎn)圈搖勻的話，很有可能由于離心力的作用使細胞甩到周邊部分，導(dǎo)致細胞中間少，四周多!自己可是試試!

　　周邊一般是相對會多一點，但是中間的數(shù)量也不會很少啊~~ 鋪板的時候我也沒有特異去振蕩培養(yǎng)板。

　　一個好辦法：在你培養(yǎng)種板之，把培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱里進行幾個小時的飽和后再取出，種入細胞時力量要輕，可采取用滴頭在培養(yǎng)板孔的側(cè)面慢慢加入讓細胞懸液流入板孔中，培養(yǎng)的細胞基本是均勻生長。記住千萬不要用振蕩器振蕩，否則你的細胞就會想你說得那樣聚積在一起。

　　5)6孔板接種和換液問題：

　　問：我的細胞傳代很正常，但一種到六孔板里(不管加藥和對照)，總有兩三個孔(隨機)細胞長得不好，很小，像破碎了。有人遇到過這種情況嗎?到底是啥原因呢?請各位指點

　　答：可能跟你加液的溫度有關(guān)。如果你細胞剛剛拿出來換液加液，培養(yǎng)基也是從4度冰箱拿出來不久，很容易細胞就會凍死了。建議你把培養(yǎng)基先在培養(yǎng)箱里邊孵育15min先。

　　6)24孔板接種問題：

　　問：把細胞消化接種到24孔板之后，已經(jīng)四天了，老是每孔的中間部分長不滿，每天換液時都用PBS  清洗，第二天換液時都出現(xiàn)同樣的情況，每孔的邊緣長的很好，中央大量死細胞?我是選擇孔內(nèi)鋪蓋玻片，在玻片上種植。每次換液都用PBS洗，必要的步驟嗎?另外，也有可能和細胞種類有關(guān)或者和培養(yǎng)液有關(guān)?

　　答：1.  我想你的培養(yǎng)液可能加的太少了。由于表面張力的作用，培養(yǎng)板的邊緣液體會向上走，造成培養(yǎng)液面呈現(xiàn)一個凹面(就像量筒的液體凹面一樣)，中央的細胞正好在凹面的處，培養(yǎng)液少，細胞的營養(yǎng)不夠，甚至干涸掉，空氣中的氧氣也會造成損傷，即使有增值過來的細胞也會死掉。

　　細胞培養(yǎng)板本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。